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聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置過程？

編輯：潔康環(huán)保發(fā)布時間：2018-01-27 10:54:50 來源：http://www.dobuleotc.cn/ 點擊：0

聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置過程

    （1）制膠在兩塊制膠玻璃板中間放上墊片，放上制膠架，擰緊制膠螺絲夾緊玻璃板。制備適量合適濃度的凝膠，使之略多于膠板。

     不同濃度（%）聚丙烯酰胺凝膠的制法：

     在加入 TEMED 和 10%過硫酸銨后，立即混勻，倒入放置 45℃角的玻璃板內(nèi)，完全注滿（注意不要有氣泡），迅速將玻璃板放置水平位置。立即放成型梳子于腔頂并夾緊，待 30-60 分鐘膠聚合后，取下膠板，放入電泳槽中固定。

    （2）加樣和電泳上下槽中加入 1×TBE 電泳緩沖液，溢過加樣孔，拔出梳子，排出加樣孔中的氣泡，將 PCR 產(chǎn)物或限制性內(nèi)切酶消化產(chǎn)物 2 與 1 上樣緩沖液混勻，用微量注射器加入加樣孔底部，使樣品在孔底成一層，兩側(cè)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)分子量的 DNA Marker。以 2-10V/cm 電壓電泳，電泳時間足夠長，使片斷足以分開，待指示劑走到適宜位置時關(guān)閉電源，將膠片取出。

     （3）銀染分開兩塊玻璃板，將凝膠片放入 100ml 銀染固定液中振蕩 15min，雙蒸水洗 3 次，每次 2min，然后將凝膠片轉(zhuǎn)入 100ml 0.2%的 AgNO3 中于搖床上染色約 10min，吸去 AgNO3 液，用雙蒸水洗 3 次，每次 30s，加入 100ml 顯色液約 7-10min，待 DNA 帶顯示清除時，吸去顯色液，加入固定液 Na2CO3，靜置 2-3min，取出凝膠觀察。

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